一、基础信息
- 中文全称:N 端生物素修饰人前血管紧张素原 (1-14)
- 英文名称:Biotinyl-Preangiotensinogen (1-14) (human)
- 三字母序列:Biotin-Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu-Val-Ile-His-Asn
- 单字母序列:Bio-DRVYIHPFHLVIHN
- 氨基酸数量:14 aa
- 分子式:C83H122N24O19
- 分子量:1760.04
- 结构修饰说明:
- N 端修饰:Biotin(简写 Bio,生物素酰基);
- 线性多肽,C 端游离羧基,无 C 端酰胺、焦谷氨酸、二硫键、环化、乙酰修饰;
- 所有氨基酸侧链无额外标记修饰。
- 结构式:
二、理化性质
1.紫外定量:含 Tyr、Phe,280 nm 紫外吸收明显,可直接紫外分光光度法测多肽浓度。
2.稳定性要点
- 无 Cys、Met,无氧化降解风险;Tyr、Phe 为光敏芳香残基,配制、储存全程避光;
- 含 Pro 残基形成局部刚性转角,N 端生物素封闭氨基端,可抵抗氨基肽酶切割;水溶液易被人肾素、ACE 剪切,建议现配现用。
3.酸碱特性
酸性残基:Asp;碱性残基:Arg、His;整体近中性偏弱酸性;pH 6.0–7.6 PBS、人血浆模拟缓冲液、肾素酶反应缓冲液稳定。
4.溶解性
末端 Asn 亲水,搭配酸碱带电氨基酸,水溶性优良,中性缓冲液常温可完全溶解。
5.空间构象
天然人肾素特异性识别构象,酶切位点位于 Leu¹⁰-Val¹¹ 之间;N 端生物素远离酶结合口袋,不影响肾素结合与酶切效率,适合亲和捕获实验。
三、来源背景
截取人源血管紧张素原成熟 N 端 1–14 天然序列,N 端偶联生物素亲和标签;是人肾素体外酶活检测专用底物,用于人 RAS 系统相关体外实验,避免猪源底物带来的物种活性偏差。
四、生物学功能
- 人肾素特异性底物,肾素在 Leu-Val 位点切割,生成人血管紧张素 I (1-10) 与 C 端 4 肽片段;
- 酶切产物 Ang I 可进一步被 ACE 催化生成升压活性肽 Ang II;
- 生物素标签可结合链霉亲和素树脂,固相捕获完整底物与酶切产物,实现分离定量。
五、科研应用
- 人源肾素体外酶活定量,高通量筛选人肾素抑制剂;
- Pull-down 富集底物 / 酶切产物,配套 HPLC、ELISA 定量分析;
- 人肾素 - 血管紧张素系统(RAS)通路机制研究;
- 人 / 猪肾素底物动力学参数对比实验;
- 高血压、肾病相关降压药物体外筛选模型。
六、溶解与储存规范
- 溶解:pH7.2 无菌 PBS 常温避光配制;
- 冻干粉:短期 - 20 ℃密封避光保存;长期分装 - 80 ℃避光储存;
- 工作液:单次分装避免反复冻融;2~8 ℃避光密封可存放 7–10 天。